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　　微流控技術(shù)是一種通過(guò)微小的通道和微型裝置對(duì)流體進(jìn)行精確操控和分析的技術(shù)。它是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)發(fā)展過(guò)程中的一種重要的生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)，具有廣泛的應(yīng)用前景和重要性。它在高通量分析、個(gè)性化醫(yī)療、細(xì)胞篩選等方面有著巨大的潛力，Aigtek安泰電子今天就將為大家分享一篇微流控領(lǐng)域研究成果，一起接著往下看吧~

大多數(shù)體內(nèi)組織細(xì)胞存在于三維細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)中。為了更好地研究細(xì)胞生理學(xué)和病理生理學(xué)，越來(lái)越需要類似于體內(nèi)的微環(huán)境以培養(yǎng)細(xì)胞，目前正在研究的策略包括水凝膠、球體、組織支架和非常有前途的微流體系統(tǒng)。大連理工大學(xué)的李經(jīng)民課題組，提出了一種3D打印支架集成的“三明治”結(jié)構(gòu)微流控裝置，用于三維動(dòng)態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)。發(fā)現(xiàn)該微流控裝置具有良好的生物相容性和可行性，在體外細(xì)胞研究、組織工程和腫瘤治療藥物篩選方面具有巨大的潛力。相關(guān)研究 “Engineering a dynamic three-dimensional cell culturing microenvironment using a ‘sandwich’ structure-liked microfluidic device with 3D printing scaffold”于2022年9月6日發(fā)表在雜志《Biofabrication》上。 

　　在二維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，細(xì)胞生長(zhǎng)在平板上，難以模擬體內(nèi)復(fù)雜的三維微環(huán)境。近幾十年來(lái)，微流控技術(shù)被廣泛采用，以提供簡(jiǎn)單、有限的3D空間來(lái)加速細(xì)胞聚集并指導(dǎo)細(xì)胞球體的形成，可用于3D動(dòng)態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)。本研究提出了一種模擬細(xì)胞外基質(zhì)和微循環(huán)的體外三維培養(yǎng)模型的建立方法。使用熱輔助電液動(dòng)力噴射(TAEJ)打印技術(shù)設(shè)計(jì)的3D微流控裝置具有“三明治”狀?yuàn)A層結(jié)構(gòu)，包括上層、支架層和底層。用其進(jìn)行HeLa細(xì)胞的三維培養(yǎng)，并與48孔板和無(wú)支架裝置中的二維培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行比較。

　　1.“三明治”式微流控裝置的設(shè)計(jì)

　　活體細(xì)胞存在于復(fù)雜的三維微環(huán)境中，其中存在諸如可溶性因子、細(xì)胞-細(xì)胞接觸、細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)相互作用和流體流動(dòng)引起的剪應(yīng)力等因素（圖1a）。受體內(nèi)細(xì)胞三維微環(huán)境的啟發(fā)，該研究設(shè)計(jì)了一種能夠?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)提供三維組織支架和動(dòng)態(tài)液的夾心式微流控裝置。該裝置由三層組成，即上層、支架層和底層(圖1b)。圖1c顯示了微流控裝置和不同上下層結(jié)構(gòu)的相應(yīng)位置。

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　　圖1微流控裝置的設(shè)計(jì)

　　2.微流控裝置的制作

　　微流控裝置的上層和底層是用聚二甲基硅氧烷（PDMS）通過(guò)復(fù)制母片上的結(jié)構(gòu)來(lái)制造的(圖2a)。支架層利用PCL/PVP復(fù)合生物聚合物墨水并采用TAEJ印刷技術(shù)制造(圖2b)。最后，使用氧等離子體處理整個(gè)裝置(圖2c)，進(jìn)行不可逆地粘合。

　　圖2微流控裝置的制造工藝示意圖

　　3.微流控裝置的結(jié)構(gòu)

　　圖3a顯示了用于打印3DPCL/PVP支架的設(shè)備。圖3b可見(jiàn)3D打印支架的掃描電子顯微鏡圖像，該支架的支架纖維平均寬度約為12微米，相鄰纖維之間的平均距離約為70微米。圖3c為支架的三維輪廓，呈現(xiàn)出均勻而光滑的特征。圖3d為PDMS上層的斷面圖像，內(nèi)部微柱為上板的凸起，凸起的高度為50微米。圖3e是底部PDMS層的截面圖像，小室的深度等于外部微柱的高度，即200微米。圖3f是粘合裝置的截面圖像，可防止因流體流動(dòng)而產(chǎn)生的變形沖刷，提高了支架結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。圖3g是用于粘合三層的設(shè)備。經(jīng)氧等離子體處理后，將一片PDMS放在上板的下表面，另一片放在底板的上表面，并在范德華力的作用下可逆結(jié)合。然后，通過(guò)調(diào)整，將兩個(gè)PDMS塊在Z方向上對(duì)齊。最后，將兩個(gè)PDMS片不可逆地粘合在一起(圖3h)。圖3i可見(jiàn)粘合的裝置充滿了紅色墨水，表明裝置內(nèi)的流動(dòng)狀況良好。

　　圖3微流控裝置的設(shè)備和結(jié)構(gòu)

　　4.支架對(duì)裝置內(nèi)流場(chǎng)的影響

　　為了研究3D打印支架對(duì)裝置內(nèi)流場(chǎng)條件的影響，定性上，通過(guò)比較顏色的漸變，可以觀察到控制室(圖4a)中的流速明顯快于支架區(qū)域(圖4b)。圖4c顯示了沿交叉線的速度曲線，這些拋物線狀曲線表明，室內(nèi)的流場(chǎng)分布明顯不均勻。相反，支架區(qū)域的流場(chǎng)分布更均勻，交叉線的曲線相對(duì)平滑(圖4d)。在圖4e-f中，藍(lán)色軌跡的長(zhǎng)度表明控制室的平均速度比支架區(qū)域的平均速度快。圖4g顯示了不同設(shè)備中平均跟蹤粒子速度的小提琴曲線圖。紅點(diǎn)和藍(lán)點(diǎn)表示速度樣本的中位數(shù)，可見(jiàn)紅色小提琴區(qū)(無(wú)支架裝置)的高度大于藍(lán)色(有支架裝置)的高度，前者的速度分布更分散，說(shuō)明支架可以為細(xì)胞培養(yǎng)提供更均勻的流動(dòng)微環(huán)境。

　　圖4微流控裝置內(nèi)的流場(chǎng)狀況及3D打印支架對(duì)其流場(chǎng)的影響

　　5.墨水流動(dòng)模擬細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程

　　為了展示細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程，研究了不同顏色油墨的流動(dòng)行為。首先，在引入HeLa細(xì)胞懸液(藍(lán)色墨水)之前，在裝置中裝滿培養(yǎng)液(紅色墨水)以去除氣體。用塞子堵住細(xì)胞入口和細(xì)胞出口，通過(guò)將培養(yǎng)液入口連接到注射器泵上，將培養(yǎng)液注入設(shè)備(圖5a)。輸注20s后，將細(xì)胞懸液(藍(lán)色墨水)注入裝置，多余的細(xì)胞懸液從細(xì)胞出口溢出。培養(yǎng)液入口和出口用塞子堵塞(圖5b)。結(jié)果表明，輸入20s后，培養(yǎng)室內(nèi)充滿藍(lán)色墨水。靜置6h后，將培養(yǎng)液輸入，細(xì)胞入口和細(xì)胞出口被堵塞(圖5c)?？梢?jiàn)灌裝500s后，該裝置充滿了紅墨水，表明培養(yǎng)室內(nèi)裝滿了培養(yǎng)液，廢液從培養(yǎng)液出口流出。

　　圖5Exo-TDN的肝臟保護(hù)作用研究

　　6.在裝置和平板中培養(yǎng)HeLa細(xì)胞

　　在3D打印支架的微流控裝置中培養(yǎng)HeLa細(xì)胞，研究其生物相容性和可行性。圖6a-c分別顯示了引入微流控裝置和平板中的HeLa細(xì)胞的初始狀態(tài)。6d-f分別顯示了HeLa細(xì)胞在微流控裝置內(nèi)和平板內(nèi)培養(yǎng)72h的狀態(tài)?？梢?jiàn)，在有支架的小室中，HeLa細(xì)胞在明場(chǎng)上的觀察受到了干擾。因此需結(jié)合活/死(綠/紅)染料染色，以進(jìn)一步估計(jì)細(xì)胞密度(圖6g-i)。這些熒光圖像中細(xì)胞亮度的變化可能表明HeLa細(xì)胞在不同的深度附著在支架上。圖6j-l分別顯示了HeLa細(xì)胞在有支架裝置、無(wú)支架裝置和48孔板中的空間分布重建。相應(yīng)地，3D重建的X-Z截面如圖6m-o所示，以表征細(xì)胞在高度(Z軸)方向上的分布?？梢悦黠@觀察到，支架裝置的細(xì)胞三維重建高度明顯大于對(duì)照組。圖6p顯示帶有支架的裝置中的細(xì)胞密度顯著大于對(duì)照裝置和平板中的細(xì)胞密度。表明，三維動(dòng)態(tài)培養(yǎng)模型在促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)方面具有優(yōu)勢(shì)。根據(jù)活/死染色結(jié)果計(jì)算活細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)之比，評(píng)價(jià)HeLa細(xì)胞的存活率。如圖6q所示，平板和對(duì)照裝置中的細(xì)胞存活率為86.7%和90.8%，而支架微流控裝置細(xì)胞存活率為95.3%，優(yōu)于對(duì)照組。圖6r顯示了培養(yǎng)72小時(shí)后，有支架微流控裝置的細(xì)胞縱橫比中位數(shù)約為3.2，是平板和無(wú)支架裝置的1.5倍以上。結(jié)果表明，支架可以促進(jìn)細(xì)長(zhǎng)和紡錘形的HeLa細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生。

　　圖6HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)在微流控裝置和平板內(nèi)

　　7.微流控裝置和平板中DOX的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在不同濃度的DOX作用下，支架組的細(xì)胞存活率始終高于對(duì)照組，且細(xì)胞存活率隨DOX濃度的增加而降低。較高濃度的DOX對(duì)HeLa細(xì)胞存活率的影響較低濃度的細(xì)胞更為顯著，除了藥物傳遞效率低下外，3D支架中形成的體內(nèi)類微環(huán)境可能在耐藥中發(fā)揮重要作用，因?yàn)檩^高的細(xì)胞密度限制了DOX對(duì)3D類組織結(jié)構(gòu)的滲透。此外，從熒光圖像中可以明顯地觀察到DOX作用24h后細(xì)胞形態(tài)的變化，支架裝置的細(xì)胞長(zhǎng)寬比中位數(shù)仍然高于其他組，意味著治療后細(xì)胞的去極化行為也表現(xiàn)出對(duì)DOX的劑量依賴性反應(yīng)，與細(xì)胞活力是一致。以上結(jié)果表明，具有支架的微流控設(shè)備，為體外細(xì)胞研究、組織工程和腫瘤治療藥物篩選提供自然的微環(huán)境（圖7）。

　　圖7微流控裝置和平板中的HeLa細(xì)胞經(jīng)不同濃度的DOX處理24h后的細(xì)胞毒性研究

　　ATA-2048高壓放大器

　　帶寬：（-3dB）DC~1MHz

　　電壓：400Vp-p（±200Vp）

　　電流：80mAp

　　功率：16Wp

　　10mV/V電壓監(jiān)測(cè)

　　可程控

　　綜上所述，研制了一種“三明治”結(jié)構(gòu)的微流控裝置，用于在有流體流動(dòng)的三維微環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)。該裝置由三層組成，上層用于引入細(xì)胞和固定支架，中間層模仿細(xì)胞外基質(zhì)提供3D附著區(qū)，底層模仿血管為細(xì)胞提供動(dòng)態(tài)培養(yǎng)液。利用3D打印技術(shù)和微細(xì)加工技術(shù)成功地制作了該器件。該支架可以為細(xì)胞培養(yǎng)提供更穩(wěn)定的流體微環(huán)境，具有良好的流動(dòng)性，促進(jìn)了細(xì)胞的生長(zhǎng)和活力。DOX的體外細(xì)胞毒性評(píng)估證實(shí)，采用3D支架模擬體內(nèi)微環(huán)境的裝置具有更高的耐藥性?？蔀轶w外細(xì)胞研究、組織工程和腫瘤治療藥物篩選提供良好的微環(huán)境。

西安安泰電子是專業(yè)從事功率放大器、高壓放大器、功率信號(hào)源、前置微小信號(hào)放大器、高精度電壓源、高精度電流源等電子測(cè)量?jī)x器研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的高科技企業(yè)，為用戶提供具有競(jìng)爭(zhēng)力的測(cè)試方案。Aigtek已經(jīng)成為在業(yè)界擁有廣泛產(chǎn)品線，且具有相當(dāng)規(guī)模的儀器設(shè)備供應(yīng)商，樣機(jī)都支持免費(fèi)試用。如想了解更多功率放大器等產(chǎn)品，請(qǐng)持續(xù)關(guān)注安泰電子官網(wǎng)www.168lai.com或撥打029-88865020。

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